Centro Agrícola Vol.45, No.3, Junio-Septiembre, 5-10, 2018
CE: 1747 CF: cag013182179
Revista Centro Agrícola
Universidad Central “Marta Abreu” de las Villas
ISSN papel: 0253-5785 ISSN on line: 2072-2001		 UCLV

ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN


Efectividad de aislados de Beauveria bassiana "sensu lato" sobre Rhipicephalus microplus


Efectivity of Beauveria bassiana isolates "sensu lato" on Rhipicephalus microplus




Elio Minel Del Pozo Núñez, Irma García Cruz, Yanira Herrera López

Universidad Agraria de La Habana (UNAH) "Fructuoso Rodríguez Pérez", Carretera a Tapaste y Autopista Nacional km 23 ½, San José de Las Lajas, Mayabeque, Cuba, CP 32700

Email: epozo@unah.edu.cu



RESUMEN. El trabajo se realizó en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de la Facultad de Agronomía de la Universidad Agraria de la Habana, Cuba, con el objetivo de determinar la efectividad in vitro de aislados de Beauveria bassiana sensu lato (Vals.) Vuill sobre huevos y neolarvas de Rhipicephalus microplus Canestrini. Los tres aislados evaluados resultaron efectivos, con más de un 85 % de mortalidad sobre las neolarvas del ectoparásito, a los 12 días de aplicados, y en el caso del aislado BB se evidenció un marcado efecto de la concentración de conidios en la suspensión sobre la eclosión de huevos que resultó nula en la mayor de las concentraciones utilizadas, y sobre la mortalidad de las neolarvas de la garrapata que fue superior al 90 % a partir de las concentraciones de 107 conidios mL-1.

Palabras clave: ectoparásito, garrapata,hongos entomopatógenos, huevos, neolarvas

ABSTRACT. The present project was developed in the Plant Protection Laboratory of the Agronomy Faculty of the Agrarian University of La Habana, Cuba, to determinate the in vitro effectivity of some isolates of Beauveria bassiana sensu lato (Vals.) Vuill. on eggs and neolarvae of Rhipicephalus microplus Canestrini. The three isolates evaluated were effective, with more than 85 % mortality over neolarvae of the ectoparasite, 12 days after application. In the case of the BB isolate a b effect of the conidia concentration in the suspension over the eclosion of eggs was evident, wich was null in the highest of the concentrations used, and the mortality of tick neolarvae, that was superior to 90 % with concentrations over 107 conidia mL-1.

Keywords: ectoparasite, ticks, entomopathogen fungi, eggs, neolarvae




INTRODUCCIÓN

La garrapata Rhipicephalus microplus Canestrinies un ectoparásito hematófago que se encuentra con frecuencia en bovinos, principalmente en las regiones tropicales y subtropicales. Es muy importante por las pérdidas que ocasiona y su gran capacidad de adaptación (Pulido y Cruz, 2013; Valdez et al., 2014; Yessinou et al., 2016). Dentro de los efectos adversos producidos por este ectoparásito, se destaca la transmisión de microorganismos los que causan daño. Así mismo, induce anemia, daño de la piel y estrés; esto último conduce a anorexia, disminución de peso y pérdidas económicas en los sistemas de producción animal (Pulido y Cruz, 2013; Nápoles et al., 2013).

A pesar de que en el ámbito mundial se han utilizado diferentes estrategias para controlar estos ectoparásitos, a través del manejo integrado con control inmunológico por medio de vacunas, hongos, etc., el método más empleado incluye el tratamiento con compuestos químicos como piretroides, organofosforados, carbamatos. Sin embargo, el uso indiscriminado de estos productos ha favorecido su residualidad en diferentes componentes del ecosistema y la selección de poblaciones de garrapatas resistentes, hasta hacer ineficaz su uso (Domínguez et al., 2016).

En Cuba, se ha generalizado el método de control integrado contra dicho ectoparásito; no obstante, existen informes de la resistencia desarrollada frente a los acaricidas de síntesis, por lo que se hace necesario replantear las estrategias utilizadas actualmente para su control. Dichas estrategias incluyen la aplicación de vacunas antigarrapatas y hongos entomopatógenos (Nápoles et al., 2013; Moncada et al., 2015).

Los hongos entomopatógenos han sido investigados por su potencial en el control biológico de garrapatas debido a su capacidad de penetrar en el tegumento de estos ectoparásitos (Domínguez et al., 2016). En particular, Beauveria bassiana sensu lato (Vals.) Vuill. es eficaz en el control de varias especies de garrapatas, incluyendo a R. microplus, por lo que es un posible agente de control biológico de esta especie (Murigu et al., 2016).

Teniendo en cuenta lo anterior se propuso la realización del presente trabajo con el objetivo de determinar la eficacia in vitro de aislados de B. bassiana sobre huevos y neolarvas de R. microplus.



MATERIALES Y MÉTODOS

El trabajo se realizó en el Laboratorio de Sanidad Vegetal, Facultad de Agronomía de la Universidad Agraria de La Habana "Fructuoso Rodríguez Pérez", San José de las Lajas, Mayabeque, Cuba.

Los aislados fúngicos utilizados y su origen, fueron los siguientes:

Para la obtención de los huevos y neolarvas de R. microplus, se recolectaron hembras ingurgitadas sobre hembras de Box taurus de la raza Holstein en la finca "El Jobo" municipio Caimito, provincia Artemisa, las cuales fueron llevadas, el mismo día, al laboratorio y sometidas a un proceso de selección sobre la base de su movilidad, tamaño y color, para buscar la homogeneidad. Posteriormente fueron colocadas individualmente en placas Petri, Esto se hizo para facilitar la obtención y manipulación de los huevos y neolarvas.

Eficacia de diferentes aislados de B. bassiana y L. lecanii sobre neolarvas de R. microplus

En este ensayo se utilizaron neolarvas de R. microplus obtenidas en el laboratorio como se describió anteriormente, de 7-10 días de edad, no alimentadas.

Además, fueron probados los cuatro aislados fúngicos ya relacionados, para lo cual se dispuso de colonias en placas Petri, de 14 días de edad, bien esporuladas, a partir de las cuales se prepararon suspensiones en agua destilada estéril más Tween 80 al 0,05 %, en frascos Erlenmeyers. Después de homogenizadas las suspensiones en un agitador Vortex, se procedió al conteo mediante la cámara de Neubauer, quedando establecidos los siguientes tratamientos:

Las neolarvas fueron tratadas por inmersión durante 1 min en las suspensiones conidiales de los distintos aislados, y posteriormente se colocaron de 20 a 25 de ellas en frascos de vidrio de 30 mL tapados con cinta de laboratorio (Parafilm "M"®) perforada con una fina aguja para permitir el intercambio gaseoso.

Los tratamientos se distribuyeron según un diseño completamente aleatorizado con cinco tratamientos y cuatro repeticiones, y las evaluaciones se realizaron a los 6 y 12 días, contando el número de neolarvas muertas, expresando el resultado como porcentaje de mortalidad. Se consideraron muertas aquellas neolarvas que no se movían al ser estimuladas con un pincel.

Los resultados obtenidos fueron transformados según la expresión aseno (p)½ y procesados mediante un análisis de varianza de clasificación simple comparándose las medias a través de la prueba de Tukey con un nivel de significación del 5 % (SAS Institute, 2009).

Efecto de diferentes concentraciones de conidios del aislado BB de B. bassiana sobre huevos de R. microplus

En este ensayo se utilizaron huevos obtenidos en el laboratorio, como ya se describió, de 5-7 días de edad, y el aislado BB de B. bassiana. En general, se siguió el procedimiento descrito en el ensayo anterior, pero los tratamientos aquí fueron suspensiones de conidios del hongo con distintos niveles de concentración: 2,1 x 109, 2,1 x 108, 2,1 x 107, 2,1 x 106, 2,1 x 105, 2,1 x 104conidios mL-1. Se usó un control con agua destilada y estéril más Tween 80 al 0,05 %.

Se utilizó un diseño completamente aleatorizado con siete tratamientos (concentraciones) y cuatro repeticiones. Cada repetición con 20-25 huevos. La evaluación se realizó a los 28 días, contando el número de larvas, a partir de lo cual se determinó el porcentaje de huevos eclosionados.

Los datos obtenidos fueron transformados según la expresión aseno (p)½ y procesados mediante un análisis de varianza de clasificación simple comparándose las medias a través de la prueba de Tukey con un nivel de significación del 5 % (SAS Institute, 2009).

Efecto de diferentes concentraciones de conidios del aislado BB de B. bassiana sobre neolarvas de R. microplus

Los procedimientos para el montaje, incubación y procesamiento de los datos fueron similares a los descritos en el primer ensayo y la evaluación del porcentaje de mortalidad se realizó a los 7 y 14 días. El criterio de mortalidad de dichas neolarvas fue que no respondían al ser estimuladas con un pincel.



RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Eficacia de diferentes aislados de B. bassiana y L. lecanii sobre neolarvas de R. microplus

En este ensayo los tres aislados de B. bassiana y la cepa Y-57 de L. lecanii fueron capaces de infectar neolarvas de R. microplus y provocar la muerte de las mismas.

Los análisis estadísticos mostraron que existen diferencias altamente significativas entre los tratamientos en los dos momentos evaluados. En la tabla 1, se puede observar que a los 6 días la mayor mortalidad se logró con el aislado BB de B bassiana y la cepa de L. lecanii, sin diferencias estadísticas entre ellas, pero sí con el resto de los tratamientos que no se diferenciaron entre ellos ni del control. Según Domínguez et al. (2016) al aplicar B. bassiana, a los 10 días la mortalidad estuvo entre un 20 y un 50 %.

A los 12 días, los tres aislados de B. bassiana lograron altos porcentajes de mortalidad, superiores al 85 %, sin diferencias estadísticas entre ellos, pero si con la cepa de L. lecanii que también logró una alta mortalidad. Es de destacar que desde hace algunos años ya se habían informado resultados de la efectividad de L. lecanii en el control de esta especie de garrapata, incluso superior a la de B. bassiana (Rijo, 2009). Más recientemente, también se ha informado sobre el buen efecto de un grupo de cepas de la especie sobre el ectoparásito (Alemán et al., 2015).

Efecto de diferentes concentraciones de conidios del aislado BB de B. bassiana sobre huevos de R. microplus

En este ensayo se apreció hubo un mayor desarrollo del hongo sobre los huevos en las concentraciones más altas, mientras que en las inferiores lo que predominó fue que de los huevos emergieran las neolarvas del ectoparásito. El análisis estadístico mostró diferencias altamente significativas entre los tratamientos, o sea, se evidenció que existe un marcado efecto de la concentración de los conidios en la eclosión de los huevos.

En la Tabla 2 se muestran los resultados del ensayo. Como puede apreciarse, todos los tratamientos con el hongo tuvieron valores estadísticamente diferentes al control. Esos valores de porcentaje de huevos eclosionados se incrementaron en la misma medida que disminuyó la concentración de conidios en la suspensión, con diferencias estadísticamente significativas entre los tratamientos, excepto el de 2,1 x 107 y 2,1 x 108 que no lo hicieron.

Castiñeiras et al. (1987) demostraron, en condiciones de laboratorio, la eficacia de dos aislamientos de B. bassiana que eliminaron hasta el 92 % de los huevos de la garrapata en unos 15 días. Estos resultados también coinciden con los informados por Narladkar et al. (2015) quienes obtuvieron hasta un 90 % de mortalidad.

Efecto de diferentes concentraciones de conidios del aislado BB de B. bassiana sobre neolarvas de R. microplus

Los análisis estadísticos mostraron que existen diferencias altamente significativas en los dos momentos evaluados. En la Tabla 3, se muestra que a los 7 días hubo mayor mortalidad en el tratamiento con la concentración más alta (2,1 x 109conidios mL-1), más de un 60 %, diferente estadísticamente de los restantes tratamientos, y a partir de 106 hasta 104 conidios mL-1se obtuvieron los menores valores de mortalidad, sin diferencia entre ellos. Para el segundo momento de evaluación, a los 14 días, los mayores valores de mortalidad (> 90 %) se registraron a partir de 109 hasta 107 conidios mL-1, sin diferencia entre ellos, pero si con los otros tratamientos. Los valores más bajos fueron en los tratamientos con las concentraciones de 105 y 104 conidios mL-1 quefueron iguales entre sí.

Los resultados de estos ensayos confirman los informes de varios autores sobre la efectividad de aislados de B. bassiana sobre R. microplus. En este sentido, Barci et al. (2009) destacaron la importancia de los aislados al evaluar la efectividad del hongo.

Narladkar et al. (2015) trabajaron con diferentes aislados de B. bassiana y encontraron un buen efecto sobre la eclosión de huevos, larvas y parámetros poblacionales de la garrapata. También Cafarchiaet al. (2015) demostraron que esta especie puede resultar efectiva sobre las diferentes fases de desarrollo de las garrapatas del género Rhipicephalus.

Por otro lado, se ha demostrado que la mortalidad de las garrapatas se incrementa en la misma medida que lo hace la concentración de conidios (Kaaya y Hedimbi, 2012; García et al. 2016).

Los resultados obtenidos en estos ensayos demuestran que en las condiciones de Cuba, se dispone de aislados de B. bassiana con potencial para ser desarrollados como agentes de control biológico de la garrapata del ganado R. microplus, aunque aún es necesario seguir profundizando en su eficacia hasta el nivel de campo, así como en su reproducción masiva, formulación y técnicas de aplicación.



CONCLUSIONES

Los tres aislados probados de B. bassiana mostraron una elevada efectividad sobre las neolarvas de R. microplus, mientras que el efecto del aislado BB sobre los huevos y neolarvas del ectoparásito aumentó en la medida que la concentración de conidios fue mayor.



BIBLIOGRAFÍA

ALEMÁN, Y., MONTANO, M., INFANTE, D., MARTÍNEZ, B. 2015. Cepas de Lecanicillium lecaniipromisorias para el control biológico de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Revista Protección Vegetal, 30 (Número Especial): 95.

BARCI, L.A., ALMEIDA, J.E., NOGUEIRA, A.H., ZAPPELINI, L.O., PRADO, A.P. 2009. Seleção de isolados do fungo entomopatogênico Beauveria bassiana (Ascomycetes: Clavicipitaceae) para o controle de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodiade). Brazilian Journal of Veterinary Parasitology, 18: 7-13.

CAFARCHIA, C., INMEDIATO, D., IATTA, R., NASCIMENTO, R.A., PORRETTA, D., AGUIAR, L., DANTAS, F., OTRANTO, D., LIA, R.P. 2015. Native strains of Beauveria bassiana for the control of Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Parasites and Vectors, 8: 80-87.

CASTIÑEIRAS, A., JIMENO, G., LÓPEZ, M., SOSA, L. 1987. Efecto de Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae (Fungi imperfecti) y Pheidole megacephala(Hymenoptera: Formicidae), contra huevos de Boophilus microplus (Acarina: Ixodidae). Revista Salud Animal, 9: 288-293.

DOMÍNGUEZ, O.M., OLIVA, M.A., AGUILAR, G., MENDOZA, P., RUIZ, B., BAUTISTA, G.U., CULEBRO, J.M., GUTIÉRREZ, F.A. 2016. Evaluation of Beauveria sp. strains, conidial concentration and inmersion times on mortality rate of bovine tick (Boophilussp.). Journal of Applied Biology and Biotechnology, 4 (4): 64-68.

GARCÍA, D.J., RODRÍGUEZ, R.I., PULIDO, M.O., DÍAZ, A.M. ANDRADE, R.J. 2016. Evaluación in vitro de Cordyceps bassiana (Ascomycota: Sordariomycetes) en el Control Biológico de Rhipicephalus microplus. Revista Investigaciones Veterinaria Perú, 27 (1): 130-136.

KAAYA, G.P., HEDIMBI, M. 2012. The use of entomopathogenic fungi, Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae, as bio-pesticides for tick control. International Journal of Agricultural Sciences, 2 (6): 245-250.

MONCADA, A.C., DAVID VILLAR, D., CHAPARRO, J.J., ANGULO, J., MAHECHA, M.L. 2015. Aproximación al uso de hongos entomopatógenos y vacunas para el control sostenible de garrapatas en sistemas ganaderos: revisión. Avances en Investigación Agropecuaria,19 (3): 55-71.

MURIGU, M.M., NANA, P., WARUIRU, R.M., NGANGA, C.J., EKESI, S., MANIANIA, N.K. 2016. Laboratory and field evaluation of entomopathogenic fungi for the control of amitraz-resistant and susceptible strains of Rhipicephalus decoloratus. Veterinary Parasitology, 225: 12–18.

NÁPOLES, D., SEBASCO, K., GUERRA, Y., MENCHO, J. 2013. Eficacia de tres ectoparasiticidas frente a Rhipicephalus microplus. Revista Producción Animal, 25 (1): 1-5.

NARLADKAR, B.W., SHIVPUJE, P.R., HARKE, P.C. 2015. Fungal Bio-Control Agents for Integrated Management of Rhipicephalus (Boophilus) microplus Ticks. Indian Veterinary Journal, 92 (5): 34 – 37.

PULIDO, N.J Y CRUZ, A. 2013. Eficacia de los extractos hidroalcohólicos de dos plantas sobre garrapatas adultas Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Corpoica Ciencia Tecnológica Agropecuaria, 14 (1): 91-97.

RIJO, E. 2009. Control de garrapata del ganado, Boophilus microplus (Canestrini) con hongos entomopatógenos. Disponible en: http://www.aguascalientes.gob.mx/codagea/produce/GARRAPAT.htm. Consultado: 10 de enero de 2016.

SAS INSTITUTE, 2009. SAS/STAT User's Guide. Version 9.3th. SAS Institute Inc., Cary, NC, USA.

VALDEZ, E., GUTIÉRREZ, E., VARGAS, M., LEZAMA, R., JUÁREZ, A., SALAS, G. 2014. Eficacia de Metarhizium anisopliae en garrapatas Rhipicephalus microplus en Indaparapeo y Tzitzio, Michoacán. Entomología Mexicana, 1: 321-325.

YESSINOU, R.E., AKPO, Y., ADOLIGBE, C., ADINCI, J., ASSOGBA, M.N., KOUTINHOUIN, B., KARIM, I.Y., FAROUGOU, S. 2016. Resistance of tick Rhipicephalus microplus to acaricides and control strategies. Journal of Entomology and Zoology Studies, 4 (6): 408-414.

Recibido el 20 febrero de 2017 y aceptado el 15 junio de 2018